Protože proteinová peptidová léčiva jsou většinou bioaktivní látky

Vzhledem k tomu, že proteinová peptidová léčiva jsou většinou bioaktivní látky a biologická aktivita nezávisí pouze na primární struktuře léčiva, ale také úzce souvisí se sekundárními a terciárními strukturami, je biotest jedinečnou a nezbytnou metodou pro studium farmakokinetiky této třídy. Biologické testy mají dva účely, přímé stanovení koncentrací léčiva v tělesných tekutinách a identifikaci biologické aktivity značených léčiv. Jeho metody lze rozdělit do dvou hlavních kategorií.
1.1.1 Analýza in vivo Konvenční metoda glykémie u myší s inzulínem atd., navíc k různým metodám stanoveným podle biologické aktivity různých typů proteinových polypeptidů, jako jsou IL-8 mobilizační neutrofily v experimentech s králíky stanovenými podle k povaze IL-8 může mobilizovat velké množství neutrofilů z kosti [1]. Tento typ metody nejvíce intuitivně odráží biologickou aktivitu, ale zahrnuje celé zvíře, je časově náročný a pracný, má nízkou citlivost a má velké variace.
1.1.2 Tkáňová (buněčná) analýza in vivo, jako je NGF stimuluje růst kuřecích dorzálních kořenových ganglií, oxytocin u potkanů ​​ex vivo děložní metoda atd. S rozvojem molekulární biologie bylo vytvořeno mnoho specifických a citlivých závislých buněčných linií. a buněčná kultivace se stala nejběžnější metodou. Podle různých mechanismů interakce proteinového peptidu s buňkami existuje mnoho specifických operací. Jako jsou proliferační testy, které jsou rychlé a citlivé, ale o něco méně specifické; Antiproliferace stejně jako detekční systém je jednoduchý, citlivý a specifický; Testy snížení cytopatického účinku [2], založené na lécích s antivirovou aktivitou, jako je interferon, chrání buňky před poškozením virem, metoda je intuitivní a citlivá, ale může být rušena podtypy peptidů. Výše uvedené metody jsou založeny na zvyšování a snižování počtu buněk jako kvantitativních a efektivních ukazatelů a metody počítání zahrnují metodu přímého počítání a metodu nepřímého počítání, druhá zahrnuje metodu MTT, metodu inkorporace izotopů (3H, 14C) atd. Kromě toho existují testy založené na nepřímé interakci polypeptidů vaječného bílku s buňkami, jako je metoda indukce protilátky kombinovaná s imunodetekcí [3], metoda enzymatického rozkladu kombinovaná s enzymatickou reakcí [4] a tak dále. Obecně platí, že metody buněčných kultur mají výhody senzitivity a specificity, objektivity a spolehlivosti, ale zjevné jsou i jejich nedostatky. Za prvé, biologické testy nemohou kvantifikovat neaktivní malé metabolity a sledovat jejich dynamiku in vivo; Za druhé, vzorky většinou existují v lidském nebo zvířecím séru a interference endogenních látek v séru a zkřížená reakce možných endogenních faktorů ovlivňuje specifičnost metody. Kromě toho jsou k zahájení biologických procesů často vyžadovány prahové cytokiny, což snižuje citlivost metody; Dlouhodobá kultivace buněk závislého kmene je náchylná k mutaci, která ovlivňuje specifitu testu.